டி. யூ. ரியாசாந்த்சேவ், ஈ.எம். சுடினோவா, எல். யூ. கோகீவா, எஸ்.என். எலன்ஸ்கி, பி.என். பாலப்கோ, ஜி. எல். பெலோவா, எஸ்.கே.
பைட்டோபதோஜெனிக் பூஞ்சை கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்கள் உருளைக்கிழங்கு மற்றும் தக்காளிகளில் ஆந்த்ராக்னோஸ் மற்றும் கிழங்கு கருப்பு புள்ளி எனப்படும் ஆபத்தான நோய்களை ஏற்படுத்துகின்றன. உருவவியல் பண்புகள் மூலம், அவை பெரும்பாலும் பிற நுண்ணுயிரிகளால் ஏற்படும் நோய்களிலிருந்து வேறுபடுவது கடினம்; பச்சை தக்காளி பழங்களில், நோய் அறிகுறியற்றதாக இருக்கலாம், பழுத்த சிவப்பு பழங்களில் மட்டுமே வெளிப்படும். நோய்க்கிருமியை விரைவாகவும் துல்லியமாகவும் கண்டறிவதற்கு, நிகழ்நேர பி.சி.ஆர் சோதனை முறை வழங்கப்படுகிறது. ஒரு சோதனை முறையை உருவாக்க, ரஷ்யாவின் பல்வேறு பகுதிகளில் உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட 45 சி. கோகோட்ஸ் விகாரங்களின் கிளிசரால் ட்ரைபாஸ்பேட் டீஹைட்ரஜனேஸ் மரபணுவின் நியூக்ளியோடைடு வரிசை தீர்மானிக்கப்பட்டது.
ஜென்பேங்க் தரவுத்தளத்தில் கிடைக்கக்கூடிய பிற உயிரினங்களின் ஒத்த முடிவுகள் மற்றும் பகுப்பாய்வுகளின் அடிப்படையில், இனங்கள் சார்ந்த ப்ரைமர்கள் மற்றும் சி. கோகோட்களுக்கான ஆய்வு ஆகியவை வடிவமைக்கப்பட்டன. உருவாக்கப்பட்ட சோதனை முறையின் தனித்துவத்தை சரிபார்க்க, தக்காளி மற்றும் உருளைக்கிழங்கு தாவரங்களுடன் தொடர்புடைய 15 வெவ்வேறு வகையான ஒட்டுண்ணி மற்றும் சப்ரோட்ரோபிக் பூஞ்சைகளின் தூய கலாச்சாரங்களிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட டி.என்.ஏ உடன் பி.சி.ஆர் செய்யப்பட்டது (புசாரியம் ஆக்சிஸ்போரம், எஃப். . கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏவின் இருப்பு 20-27 என்ற வாசல் சுழற்சியில் தீர்மானிக்கப்பட்டது, மற்ற இனங்கள் 40 சுழற்சிகளுக்குப் பிறகு கண்டறியப்பட்டன அல்லது கண்டறியப்படவில்லை. பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட பி.சி.ஆர் கலவையில் சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏ செறிவுகளை 0.01 ng / mm3 க்கும் அதிகமாக சோதனை முறை நம்பத்தகுந்த முறையில் கண்டறிய உதவுகிறது. வளர்ந்த சோதனை முறையைப் பயன்படுத்தி, பூஞ்சை நோய்களின் அறிகுறிகளுடன் தக்காளி இலைகளிலும், நோயின் வெளிப்புற அறிகுறிகள் இல்லாமல் உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளிலும் சி. கோகோட்கள் இருப்பது ஆராயப்பட்டது. கிராஸ்னோடர் பிரதேசத்தில் உள்ள இரண்டு வெவ்வேறு துறைகளிலிருந்து கிழங்குகளும் - கோஸ்ட்ரோமா, மாஸ்கோ, கலுகா, நிஷ்னி நோவ்கோரோட் பகுதிகளில் உள்ள வயல்களில் இருந்து பூஞ்சை தொற்று அறிகுறிகளுடன் இலைகள் சேகரிக்கப்பட்டன. சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏ கொண்ட ஒரு தக்காளி இலை கிராஸ்னோடர் பிரதேசத்தில் காணப்பட்டது; இந்த நோய்க்கிருமியின் டி.என்.ஏவின் குறிப்பிடத்தக்க இருப்பு கோஸ்ட்ரோமா, மாஸ்கோ, கலுகா பகுதிகளில் வளர்க்கப்பட்ட கிழங்குகளின் 5 மாதிரிகளில் கண்டறியப்பட்டது.
அறிமுகம்
கோலெட்டோட்ரிச்சம் இனத்தின் காளான்கள் தானியங்கள், காய்கறிகள், மூலிகைகள், வற்றாத பழங்கள் மற்றும் பெர்ரி தாவரங்களை பாதிக்கும் ஆபத்தான பைட்டோபாத்தோஜன்கள் ஆகும். இந்த இனத்தின் எங்கும் நிறைந்த உயிரினங்களில் ஒன்றான கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்ஸ் (வால்ர்).
ஹியூஸ், உருளைக்கிழங்கு மற்றும் தக்காளியின் ஆந்த்ராக்னோஸ் மற்றும் கறுப்புப் புள்ளியின் காரணியாகும், மேலும் சோலனேசி குடும்பத்தின் பல தாவரங்களின் நோய்களை ஏற்படுத்துகிறது. களைகள் (டில்லார்ட், 1992). சி. கோகோட்கள் தாவரத்தின் அனைத்து நிலத்தடி பாகங்கள், தண்டு தளங்கள், இலைகள் மற்றும் பழங்களை பாதிக்கிறது (ஆண்ட்ரிவோன் மற்றும் பலர், 1998; ஜான்சன், 1994). பாதிக்கப்பட்ட உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளின் தலாம் மீது, தெளிவாக உச்சரிக்கப்படும் விளிம்புகளைக் கொண்ட சாம்பல் புள்ளிகளின் வளர்ச்சி காணப்படுகிறது, இதில் கருப்பு புள்ளிகள் ஸ்போரேலேஷன் மற்றும் மைக்ரோஸ்கிளெரோட்டியா தெளிவாகத் தெரியும். சேமிப்பகத்தின் போது, கிழங்கிய கூழில் மென்மையாக்கப்பட்ட உள்ளடக்கங்களைக் கொண்ட புண்கள் உருவாகலாம், அதாவது. இந்த நோய் ஆந்த்ராக்னோஸ் கட்டத்தில் நுழைகிறது, இருப்பினும், இது மிகவும் அரிதானது.
அதே நேரத்தில், ஆந்த்ராக்னோஸின் அறிகுறிகள் (சிறிய கருப்பு புள்ளிகள் கொண்ட தோல் புண்கள்) தக்காளி பழங்களுக்கு பொதுவானவை. இலைகளில், சி. கோகோட்களின் அறிகுறிகள் அடர் பழுப்பு நிற புள்ளிகளாகத் தோன்றும், அவை பொதுவாக மஞ்சள் திசுக்களால் எல்லைகளாக இருக்கும் (ஜான்சன், 1994).
கிழங்குகளில் கருப்பு புள்ளியின் வளர்ச்சி அவற்றின் தோற்றத்தை கெடுத்துவிடும், இது குறிப்பாக கழுவப்பட்ட சிவப்பு-தலாம் உருளைக்கிழங்கை விற்கும்போது உச்சரிக்கப்படுகிறது. தலாம் நீக்கம் அதிகப்படியான ஆவியாதல் மற்றும் அதிகரித்த சேமிப்பு இழப்புகளுக்கு வழிவகுக்கிறது (பசி, மெக்கிண்டயர், 1979). பிற தாவர உறுப்புகளுக்கு ஏற்படும் சேதம் விளைச்சலை இழக்க வழிவகுக்கிறது, இது திறந்த மற்றும் மூடிய நிலங்களில் குறிப்பிடப்பட்டுள்ளது (ஜான்சன், 1994; ட்ரோர் மற்றும் பலர்., 1999). சி. கோகோட்களால் ஏற்படும் நோய்கள் ரஷ்யா உட்பட உலகின் கிட்டத்தட்ட உருளைக்கிழங்கு உற்பத்தி செய்யும் அனைத்து பகுதிகளிலும் பொதுவானவை (லீசா, ஹில்டன், 2003; பெலோவ் மற்றும் பலர், 2018). சி. கோகோட்களுக்கு எதிராக இருக்கும் பூசண கொல்லிகளின் போதுமான செயல்திறன் மற்றும் எதிர்ப்பு வகைகளின் பற்றாக்குறை காரணமாக இந்த நோய்களைக் கட்டுப்படுத்துவது கடினம் (படிக்க, மறை, 1995).
சி. கோகோட்களின் இனோகுலம் விதை கிழங்குகளில் (படிக்க, மறை, 1988; ஜான்சன் மற்றும் பலர்., 1997), தக்காளி விதைகள் (பென்-டேனியல் மற்றும் பலர்., 2010), மண்ணில் நீண்ட காலமாக உயிர்வாழும், தாவர குப்பைகள் (டில்லார்ட், 1990; டில்லார்ட் மற்றும் கோப், 1993) மற்றும் களைகளில் (ரெய்டு மற்றும் பென்னிபாக்கர், 1987). பல எழுத்தாளர்களின் படைப்புகள் (படிக்க, மறை, 1988; பார்க்டால், டேவிஸ், 1992; ஜான்சன் மற்றும் பலர், 1997; டில்லார்ட், கோப், 1993) உருளைக்கிழங்கு மற்றும் தக்காளிகளில் நோயின் வளர்ச்சி பெரும்பாலும் இருப்பதைப் பொறுத்தது என்பதைக் காட்டுகிறது விதை மற்றும் மண்ணில் இனோகுலம். ஆகையால், நோயிலிருந்து ஏற்படும் இழப்புகளைக் குறைக்க, விதைப் பொருளில், மண்ணில், விதை உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளிலும், சேமிப்பிற்காக வைக்கப்பட்ட தக்காளி விதைகளிலும் பூஞ்சையின் பிரச்சாரங்களைக் கண்டறிவது (அளவு உட்பட) அவசியம். மண் மற்றும் தாவரப் பொருட்களில் உருவவியல் கண்டறிதல் மைக்ரோஸ்கிளெரோட்டியாவின் முன்னிலையில் மட்டுமே மேற்கொள்ளப்பட முடியும், இருப்பினும், அவை மற்ற வகை பூஞ்சைகளிலும் காணப்படுகின்றன.
கிழங்குகளில் உள்ள அறிகுறிகள் ஹெல்மின்தோஸ்போரியம் சோலானி என்ற பூஞ்சையால் ஏற்படும் வெள்ளி வடுவுக்கு மிகவும் ஒத்தவை. கொலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்கள் மற்றும் ஹெல்மின்தோஸ்போரியம் சோலானி ஆகியவற்றை தூய்மையான கலாச்சாரமாக தனிமைப்படுத்துவது மிகவும் கடினம் மற்றும் ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தில் மெதுவான வளர்ச்சியின் காரணமாக நீண்ட நேரம் எடுக்கும். கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்களை விரைவாக அடையாளம் காண, கருவி கண்டறியும் முறைகளைப் பயன்படுத்துவது அவசியம். மிகவும் வசதியான முறை பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை (பி.சி.ஆர்) மற்றும் அதன் மாற்றம் - நிகழ்நேர பி.சி.ஆர். தற்போது, ஆர்.டி.என்.ஏவின் ஐ.டி.எஸ் 2002 பிராந்தியத்திற்காக பிரிட்டிஷ் ஆராய்ச்சியாளர்கள் (கல்லன் மற்றும் பலர், 1) உருவாக்கிய சோதனை முறை ஐரோப்பாவிலும் அமெரிக்காவிலும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. அதன் பயன்பாடு ரஷ்ய தனிமைப்படுத்தல்களின் பகுப்பாய்வில் நல்ல முடிவுகளைக் காட்டியுள்ளது (பெலோவ் மற்றும் பலர், 2018). இருப்பினும், சி. கோகோட்கள் மிகவும் மாறுபடும் மற்றும் ஒற்றை டி.என்.ஏ வரிசையிலிருந்து அதைக் கண்டறிவது தவறான எதிர்மறை முடிவுகளுக்கு வழிவகுக்கும். மிகவும் நம்பகமான நோயறிதலுக்காக, கிளைசெரால்டிஹைட் -3-பாஸ்பேட் டீஹைட்ரஜனேஸ் மரபணுவின் வரிசையால் சி. கோகோட்களை அடையாளம் காண அனுமதிக்கும் அசல் சோதனை முறையை நாங்கள் உருவாக்கியுள்ள பல இனங்கள் சார்ந்த டி.என்.ஏ காட்சிகளை பகுப்பாய்வு செய்வது அவசியம்.
பொருட்கள் மற்றும் முறைகள்
உருவாக்கப்பட்ட சோதனை முறைகளின் செயல்திறன் மற்றும் தனித்துவத்தை மதிப்பிடுவதற்கு, தக்காளி இலைகள் மற்றும் பழங்கள், உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகள் (அட்டவணை 15) ஆகியவற்றின் நோயுற்ற மாதிரிகளிலிருந்து ஆசிரியர்களால் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட 1 வகையான பூஞ்சைகளின் தூய கலாச்சாரங்களைப் பயன்படுத்தினோம். தனிமைப்படுத்துவதற்கு, பூஞ்சை தொற்று அறிகுறிகளுடன் தாவரங்களின் உறுப்புகளை எடுத்தோம், ஒரு புஷ் ஒன்றுக்கு ஒன்றுக்கு மேற்பட்ட உறுப்பு இல்லை.
ஒரு கிழங்கின் ஒரு துண்டு, ஒரு தக்காளி பழத்தின் ஒரு துண்டு, மற்றும் பாதிக்கப்பட்ட இலை ஆகியவை தொலைநோக்கியின் நுண்ணோக்கின் கீழ் வைக்கப்பட்டன, அதன் பிறகு மைசீலியம், வித்திகள் அல்லது திசு துண்டுகள் ஒரு அகார் ஊடகத்தில் (வோர்ட் அகார்) மாற்றப்பட்டன. கூர்மையான துண்டிக்கும் ஊசியுடன் பெட்ரி டிஷ். தனிமைப்படுத்தல்கள் அகர் சாய்வில் சோதனைக் குழாய்களில் 4 ° C இல் சேமிக்கப்பட்டன.
சேகரிக்கப்பட்ட உடனேயே (புலத்தில்) பகுப்பாய்வு செய்ய விரும்பும் பூஞ்சை நோய்களின் அறிகுறிகளுடன் தக்காளி இலைகளின் மாதிரிகள் 70% எத்தில் ஆல்கஹால் வைக்கப்பட்டன, அதில் அவை டி.என்.ஏ தனிமைப்படுத்தும் வரை சேமிக்கப்பட்டன. உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளும் ஆய்வகத்திற்கு வழங்கப்பட்டன, அவற்றில் இருந்து உரிக்கப்பட்டு (2 × 1 செ.மீ துண்டு), மற்றும் –20 at at இல் உறைந்தன. டி.என்.ஏ தனிமைப்படுத்தும் வரை உறைந்திருக்கும்.
டி.என்.ஏ தனிமைப்படுத்தலுக்கான பூஞ்சைகளின் தூய கலாச்சாரங்கள் திரவ பட்டாணி ஊடகத்தில் வளர்க்கப்பட்டன. பூஞ்சையின் மைசீலியம் திரவ ஊடகத்திலிருந்து அகற்றப்பட்டு, வடிகட்டி காகிதத்தில் உலர்த்தப்பட்டு, திரவ நைட்ரஜனில் உறைந்து, ஒரே மாதிரியாக, சி.டி.ஏ.பி. ஆல்கஹால். இதன் விளைவாக டி.என்.ஏ டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட நீரில் கரைக்கப்பட்டு –0.5 ° at (குதுசோவா மற்றும் பலர்., 2) இல் சேமிக்கப்பட்டது. குபிட் 70 (கியாஜென், ஜெர்மனி) இல் இரட்டை இழைந்த டி.என்.ஏ க்காக எச்.எஸ் டி.என்.ஏ அளவீட்டு கருவியைப் பயன்படுத்தி டி.என்.ஏ செறிவு அளவிடப்பட்டது. ஆல்கஹால் மற்றும் உறைந்த மாதிரிகள் திரவ நைட்ரஜனில் திரிக்கப்பட்டன, பின்னர் மேலே விவரிக்கப்பட்டபடி டி.என்.ஏ தனிமைப்படுத்தப்பட்டது (தூய பூஞ்சை கலாச்சாரங்களின் மைசீலியத்திற்கு).
அட்டவணை 1. வேலையில் பயன்படுத்தப்படும் பூஞ்சை விகாரங்களின் தோற்றம்
காளான் பெயர் | ஆலை, உறுப்பு | தேர்வு செய்யும் இடம் |
---|---|---|
கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்ஸ் 1, சி. கோகோட்ஸ் 2, சி. கோகோட்ஸ் 3, இலியோனெக்ட்ரியா க்ராஸா, ரைசோக்டோனியா சோலானி | உருளைக்கிழங்கு கிழங்கு | கோஸ்ட்ரோமா பகுதி, 1 வது கள தலைமுறையின் உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளும், சாகுபடி ரெட் ஸ்கார்லெட் |
கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்கள் 4 | உருளைக்கிழங்கு இலை | பிரதிநிதி. மாரி எல், யோஷ்கர்-ஓலா |
ஹெல்மின்தோஸ்போரியம் சோலானி | உருளைக்கிழங்கு கிழங்கு | மகடன் பகுதி, போஸ். கூடாரம், உருளைக்கிழங்கு கிழங்கு |
கிளாடோஸ்போரியம் ஃபுல்வம் | தக்காளி இலை | மாஸ்கோ பகுதி, பெரிய பழ பழ தக்காளி |
மாற்று தக்காளி | தக்காளி பழம் | அனைத்து ரஷ்ய ஆராய்ச்சி நிறுவன தாவர பாதுகாப்பு நிறுவனத்தின் புவியியல் மற்றும் பைட்டோபா ಥ ாலஜி ஆய்வகத்தின் ஊழியர்களால் ஒப்படைக்கப்பட்டது |
ஃபுசாரியம் வெர்டிசில்லியம், ஃபோமோப்சிஃபாசோலி, ஆல்டர்நேரியா ஆல்டர்னேட்டா, ஃபெலினஸ் ஃபெருகினோவெலூட்டினஸ், ஸ்டெம்பிலியம் வெசிகேரியம், கிளாடோஸ்போரியம் கிளாடோஸ்போரியாய்டுகள், அக்ரோடோன்டியம் லுசுலே, பென்சிலியம் எஸ்பி. | தக்காளி பழம் | கிராஸ்னோடர் மண்டலம், கிரிமியன் மாவட்டம், கிரேடு கிரீம் |
புசாரியம் ஆக்சிஸ்போரம் | கோதுமை வேர் | மாஸ்கோ பிராந்தியம் |
பி.சி.ஆர் ஒரு டி.டி.பிரைம் பெருக்கியில் (டி.என்.ஏ-தொழில்நுட்பம்) செய்யப்பட்டது. பி.சி.ஆரைப் பொறுத்தவரை, அசல் ப்ரைமர்கள் மற்றும் கிளிசரால் ட்ரைபாஸ்பேட் டீஹைட்ரஜனேஸ் மரபணுவின் இனங்கள் சார்ந்த பகுதிக்கான ஆய்வு பயன்படுத்தப்பட்டது: ஃபார்வர்ட் ப்ரைமர் கோக் 70 ஜி.டி.எஃப்-டி.சி.டி.ஜி.ஏ.டி.டி.டி.சி.டி.சி.ஜி.ஜி.ஏ, ரிவர்ஸ் ப்ரைமர் கோக் 280 ஜி.டி.ஆர் - டாக்டாகாக்காட்ஜிஜிஜிஜிஜிஜி 1). ப்ரைமர்கள் 213 பிபி பகுதியை பெருக்குகின்றன.
எதிர்வினை மொத்த டி.என்.ஏவின் 50 என்.ஜி (இலைகள் மற்றும் கிழங்குகளின் பகுப்பாய்வில்) மற்றும் 10 என்.ஜி (பூஞ்சைகளின் தூய கலாச்சாரங்களின் டி.என்.ஏ பகுப்பாய்வில்) எடுத்தது. எதிர்வினை கலவை (35 μl) ஒரு பாரஃபின் அடுக்கு மூலம் இரண்டு பகுதிகளாக பிரிக்கப்பட்டது: கீழ் ஒன்று (20 μl) 2 × எதிர்வினை இடையகத்தின் 10 μl (750 எம்.எம். mM MgCl8.8; 200% இடையில்- 4), ஒவ்வொரு டியோக்ஸினியூக்ளியோடைடு ட்ரைபாஸ்பேட்டின் 2 எம்.எம். மேல் ஒன்றில் 4 ×l 25 × PCR இடையகமும் 2 U Taq பாலிமரேஸும் உள்ளன.
பாரஃபினுடன் கலவையைப் பிரிப்பது 5 ° C வெப்பநிலையில் குழாய்களை நீண்ட நேரம் சேமித்து வைக்கவும், 10 ° C க்கு மேல் வெப்பநிலையில் 80 நிமிடம் வெப்பப்படுத்திய பின் பி.சி.ஆருக்கு ஒரு சூடான தொடக்கத்தை வழங்கவும் அனுமதிக்கிறது. பி.சி.ஆர் பின்வரும் திட்டத்தின் படி மேற்கொள்ளப்பட்டது: 94.0 ° C - 90 s (1 சுழற்சி); 94.0 ° C - 30 கள்; 64.0 ° C - 15 கள் (5 சுழற்சிகள்); 94.0 ° C - 10 கள்; 64.0 ° C - 15 கள் (45 சுழற்சிகள்); 10.0 ° C - சேமிப்பு.
முடிவுகள் மற்றும் விவாதம்
கிளிசரால் ட்ரைபாஸ்பேட் டீஹைட்ரஜனேஸ் மரபணுவின் வரிசைமுறைகள் ரஷ்யாவின் வெவ்வேறு பகுதிகளில் இலைகள், தண்டுகள், உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகள் மற்றும் தக்காளி பழங்கள் (குட்டுசோவா, 45) ஆகியவற்றிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட 2018 விகாரங்களில் தீர்மானிக்கப்பட்டது. அனைத்து விகாரங்களின் ஆய்வு வரிசைகளும் இரண்டு குழுக்களாக இரண்டு நியூக்ளியோடைட்களில் வேறுபடுகின்றன. KY2 மற்றும் KY496634 எண்களின் கீழ் இரு குழுக்களின் பிரதிநிதிகளின் நியூக்ளியோடைடு வரிசைமுறைகள் ஜென்பேங்கில் டெபாசிட் செய்யப்படுகின்றன.
ப்ரைமர்கள் coc70gdf, coc280gdr மற்றும் அவற்றின் அடிப்படையில் வடிவமைக்கப்பட்ட cocgdz ஆய்வு ஆகியவை BLAST நிரலைப் பயன்படுத்தி சரிபார்க்கப்பட்டன (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) கொலெட்டோட்ரிச்சம் இனத்தின் கிளிசரால் ட்ரைபாஸ்பேட் டீஹைட்ரஜனேஸ் மரபணுவின் அனைத்து வரிசைகளிலும் மற்றும் ஜென்பேங்க் தரவுத்தளத்தில் கிடைக்கும் பிற உயிரினங்களிலும்.
பிற உயிரினங்களின் டி.என்.ஏ பகுதிகள் ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுக்கு மிகவும் ஒத்ததாக இல்லை.
சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏ, ஆந்த்ராக்னோஸ் நோயால் பாதிக்கப்பட்ட உருளைக்கிழங்கு இலையிலிருந்து டி.என்.ஏ (மாரி எல், 2017 இல் சேகரிக்கப்பட்ட ரெட் ஸ்கார்லெட்) மற்றும் கருப்பு புள்ளியால் பாதிக்கப்பட்ட கிழங்குகளின் தலாம் (சேகரிக்கப்பட்டவை) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி சோதனை முறையின் உணர்திறன் சரிபார்க்கப்பட்டது. கோஸ்ட்ரோமா பிராந்தியத்தில், ரெட் ஸ்கார்லெட், அட்டவணை 2). கிழங்குகள் மற்றும் உருளைக்கிழங்கு இலைகளில் டி.என்.ஏ இருப்பதை உறுதிப்படுத்த, சி. கோகோட்ஸ் விகாரங்கள் அவற்றிலிருந்து தூய கலாச்சாரங்களாக தனிமைப்படுத்தப்பட்டன.
சோதனை முறையின் உணர்திறன் பகுப்பாய்வின் முடிவுகள், பி.சி.ஆர் கலவையில் அதன் மொத்த உள்ளடக்கம் 0.05 என்.ஜி.க்கு அதிகமாக இருக்கும்போது ஒரு மாதிரியில் சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏ இருப்பதை வெற்றிகரமாக கண்டறிய இது பயன்படுகிறது என்பதைக் காட்டுகிறது. ஒரு ஸ்கெலரோட்டியா சராசரியாக 0.131 என்.ஜி., மற்றும் ஒரு வித்து 0.04 என்.ஜி டி.என்.ஏவைக் கொண்டிருப்பதால் இது கண்டறிவதற்கு மிகவும் போதுமானது (கல்லன் மற்றும் பலர்., 2002). ஆங்கிலக் குழுவால் உருவாக்கப்பட்ட சோதனை முறை (கல்லன் மற்றும் பலர், 2002) இதேபோன்ற உணர்திறனைக் காட்டியது (வாசல் சுழற்சி 34 0.05 என்ஜி டிஎன்ஏ மற்றும் 37 0.005 என்ஜி).
எல்லா நிகழ்வுகளிலும் சி. கோகோட்களைக் கொண்ட இயற்கை மாதிரிகளின் பகுப்பாய்வு மாதிரியில் அதன் இருப்பை நம்பத்தகுந்த முறையில் வெளிப்படுத்த முடிந்தது (அட்டவணை 2). டி.என்.ஏ தனிமைப்படுத்தலுக்கான முன்மொழியப்பட்ட முறை இயற்கை தாவர மாதிரிகளின் பகுப்பாய்விற்கும் பொருந்தும்.
அட்டவணை 2. நிகழ்நேர பி.சி.ஆருக்கான கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்களை அடையாளம் காண முன்மொழியப்பட்ட சோதனை முறையின் உணர்திறனை தீர்மானித்தல்
Образец | மாதிரியில் உள்ள டி.என்.ஏ அளவு *, ng | வாசல் சுழற்சி | சி. கோகோட்களைக் கண்டறிதல் |
---|---|---|---|
மைசீலியம் கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்கள் | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
கிழங்கு தலாம் 1 | 50 | 32 | + |
கிழங்கு தலாம் 2 | 50 | 30 | + |
கிழங்கு தலாம் 3 | 50 | 31.5 | + |
உருளைக்கிழங்கு இலை | 50 | 29.5 | + |
குறிப்பு. * பி.சி.ஆர் தயாரிப்புகளின் கலவையில்.
15 வகையான பூஞ்சைகளிலிருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட டி.என்.ஏ மாதிரிகளில் சோதனை முறையின் தனித்துவத்தை சோதித்தல் மேற்கொள்ளப்பட்டது. பாதிக்கப்பட்ட மற்றும் ஆரோக்கியமான பழங்கள் மற்றும் தக்காளி, உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளின் இலைகளிலிருந்து ஆசிரியர்களால் பூஞ்சைகளின் அனைத்து விகாரங்களும் தனிமைப்படுத்தப்பட்டன; ஒரு திரிபு கோதுமை வேரிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்டது (அட்டவணை 1). பழத்தின் மேற்பரப்பில் இருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட உயிரினங்களில், தக்காளிக்கு நோய்க்கிருமி இல்லாத உயிரினங்களும் உள்ளன (எடுத்துக்காட்டாக, பெல்லினஸ் ஃபெருஜினோவெலூட்டினஸ்).
சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏ 20-27 என்ற நுழைவாயிலின் சுழற்சியில் கண்டறியப்பட்டதாக ஆய்வுகள் தெரிவிக்கின்றன, அதே நேரத்தில் மற்ற பூஞ்சை இனங்கள் கண்டறியப்படவில்லை அல்லது சுழற்சி 40 க்குப் பிறகு ஒரு சமிக்ஞையை வழங்கின, அவை ஒரு குறிப்பிட்ட சத்த விளைவு (அட்டவணை 3) காரணமாக இருக்கலாம்.
அட்டவணை 3. பல்வேறு வகையான காளான்களுக்கான சோதனை முறையை சரிபார்க்கிறது
காளான் பெயர் | வாசல் சுழற்சி |
கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்கள் 1 | 20.9 |
சி. கோகோட்கள் 2 | 22.6 |
சி. கோகோட்கள் 3 | 23 |
சி. கோகோட்கள் 4 | 22 |
புசாரியம் ஆக்சிஸ்போரம் | > 40 |
எஃப். வெர்டிசிலியம் | > 40 |
Rhizoctonia solani | > 40 |
ஃபோமோப்சிஸ் ஃபெசோலி | > 40 |
மாற்று மாற்று | > 40 |
A. தக்காளி | > 40 |
ஹெல்மின்தோஸ்போரியம் சோலானி | > 40 |
ஃபெலினஸ் ஃபெருஜினோவெலூட்டினஸ் | > 40 |
ஸ்டெம்பிலியம் வெசிகேரியம் | > 40 |
இலியோனெக்ட்ரியா கிராசா | > 40 |
கிளாடோஸ்போரியம் கிளாடோஸ்போரியாய்டுகள் | > 40 |
சி. ஃபுல்வம் | > 40 |
அக்ரோடோன்டியம் லுசுலே | > 40 |
பெனிசீலியம் எஸ்பி. | > 40 |
குறிப்பு. * அனைத்து மாதிரிகளிலும் டி.என்.ஏ அளவு 10 என்.ஜி.
வளர்ந்த சோதனை முறை தக்காளி இலை மாதிரிகளில் சி. கோகோட்களை நெக்ரோட்ரோபிக் நோய்க்கிருமிகள் மற்றும் விதை உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளின் அறிகுறிகளுடன் அடையாளம் காண பயன்படுத்தப்பட்டது. ஆய்வுக்காக, கோஸ்ட்ரோமா, மாஸ்கோ, கலுகா, நிஜ்னி நோவ்கோரோட் பகுதிகளில் வளர்க்கப்படும் பல்வேறு வகைகளின் விதை கிழங்குகளை எடுத்தோம். சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏவின் இருப்பு மாதிரிகளில் குறிப்பிடத்தக்கதாகக் கருதப்பட்டது, அதன் பகுப்பாய்வில் வாசல் சுழற்சி 35 ஐத் தாண்டவில்லை. 0.05 ng சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏவின் நம்பகமான தீர்மானத்தின் அடிப்படையில் இந்த வாசல் மதிப்பு தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது (வாசல் சுழற்சி 33.5, அட்டவணை 2) மற்றும் 40 க்கு மேலான வாசல் சுழற்சிகள், வேறு சில வகை பூஞ்சைகளின் குறிப்பிடப்படாத டி.என்.ஏ கண்டறியப்பட்டது. இந்த அணுகுமுறையுடன், சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏவின் குறிப்பிடத்தக்க இருப்பு கோஸ்ட்ரோமா, மாஸ்கோ, கலுகா பகுதிகளில் வளர்க்கப்பட்ட கிழங்குகளின் 5 மாதிரிகள் மற்றும் கிராஸ்னோடார் பிராந்தியத்தின் யெய்க் பகுதியிலிருந்து ஒரு தக்காளி இலைகளில் கண்டறியப்பட்டது (அட்டவணைகள் 4, 5).
அட்டவணை 4. உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளில் கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்களைக் கண்டறிதல் *
மாதிரி எண் | உருளைக்கிழங்கு பல்வேறு | வளர்ச்சி இடம் | சி. கோகோட்களைக் கண்டறிதல் | வாசல் சுழற்சி |
---|---|---|---|---|
1 | சிவப்பு ஸ்கார்லெட் | கோஸ்ட்ரோமா பகுதி | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | சாண்டே | மாஸ்கோ பிராந்தியம் | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | Zhukovsky ஆரம்பத்தில் | மாஸ்கோ பிராந்தியம் | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | மோலி | கலுகா. | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | கற்பனை | கலுகா. | - | |
15 | கண்கவர் | Nizhny Novgorod பிராந்தியம். | - | |
16 | - |
குறிப்பு. * அனைத்து மாதிரிகளிலும் டி.என்.ஏ அளவு 50 என்.ஜி.
அட்டவணை 5. தக்காளி இலைகளில் கோலெட்டோட்ரிச்சம் கோகோட்களைக் கண்டறிதல் *
மாதிரி எண் | வளர்ச்சி இடம் | சி. கோகோட்களைக் கண்டறிதல் | வாசல் சுழற்சி |
---|---|---|---|
1 | கிராஸ்னோடர் பிரதேசம், கிரிமியன் மாவட்டம் | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | கிராஸ்னோடர் பிரதேசம், யெய்ஸ்க் மாவட்டம் | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* அனைத்து மாதிரிகளிலும் டி.என்.ஏ அளவு 50 என்.ஜி.
எங்களால் உருவாக்கப்பட்ட சோதனை முறை பிரிட்டிஷ் ஆராய்ச்சியாளர்கள் (கல்லன் மற்றும் பலர், 2002) உணர்திறன் மற்றும் தனித்துவத்தில் உருவாக்கியதை விட தாழ்ந்ததல்ல மற்றும் தாவர மாதிரிகளின் பகுப்பாய்விற்கு ஏற்றது. விதை கிழங்குகளின் பகுப்பாய்விற்கான அதன் பயன்பாடு, சேதத்தின் வெளிப்புற அறிகுறிகள் இல்லாமல் கிழங்குகளில் சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏவை அடையாளம் காணவும், இலைகளின் தொற்றுநோயை வெற்றிகரமாக பகுப்பாய்வு செய்யவும் முடிந்தது.
இன்றுவரை, சி. கோகோட்களின் தொற்றுக்கு உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளின் பகுப்பாய்வு எதுவும் ரஷ்யாவில் மேற்கொள்ளப்படவில்லை. எங்கள் முதல் ஆய்வில், ரஷ்ய கூட்டமைப்பின் வெவ்வேறு பகுதிகளில் வளர்க்கப்பட்ட சோதனை செய்யப்பட்ட 16 விதை கிழங்குகளில், 5 இல் சி. கோகோட்கள் உள்ளன. உருளைக்கிழங்கு கிழங்குகளின் கருப்பு புள்ளி ரஷ்யாவில் ஒரு பொதுவான உருளைக்கிழங்கு நோயாகும் என்பதை இது காட்டுகிறது, மேலும் உருளைக்கிழங்கு பயிரின் அளவையும் தரத்தையும் குறைப்பதில் அதன் பங்கு குறைத்து மதிப்பிடப்படுகிறது.
தக்காளி இலைகளின் பகுப்பாய்வு கிராஸ்னோடர் பிரதேசத்தின் யீஸ்க் மாவட்டத்திலிருந்து ஒரு இலையில் சி. கோகோட்ஸ் டி.என்.ஏவின் குறிப்பிடத்தக்க இருப்பை வெளிப்படுத்தியது. முன்னதாக, பிரிட்டிஷ் சோதனை முறையைப் (கல்லன் மற்றும் பலர், 2002) பயன்படுத்தி தெற்கு ரஷ்யாவில் தக்காளி வயல்களை ஆய்வு செய்தபோது, சி. கோகோட்கள் கொண்ட இலைகள் அடையாளம் காணப்பட்டன, மேலும் சில துறைகளில் சி. கோகோட்களால் பாதிக்கப்பட்ட இலைகளின் அதிக விகிதம் கண்டறியப்பட்டது (பெலோவ் மற்றும் அல்., 2018). மாஸ்கோ பிராந்தியமான கிராஸ்னோடார் மற்றும் பிரிமோர்ஸ்கி பிரதேசங்களில், தக்காளி பழங்களைக் கண்டோம், அதிலிருந்து சி. கோகோட்களின் தூய கலாச்சாரங்களை தனிமைப்படுத்த முடிந்தது. சி. கோகோட்கள் ரஷ்யாவில் தக்காளியில் இப்போது பரவலாக நம்பப்படுவதை விட மிகவும் பரவலாக இருக்கக்கூடும், மேலும் அதன் தீங்கு குறைத்து மதிப்பிடப்படுகிறது.
எனவே, இன்றுவரை, உருளைக்கிழங்கு மற்றும் தக்காளி மீது சி. கோகோட்களின் பரவலான விநியோகம் குறித்து போதுமான தகவல்கள் குவிந்துள்ளன.
உருளைக்கிழங்கு மற்றும் தக்காளி நோய்களின் வளர்ச்சியில் இந்த பூஞ்சையின் பங்கை நன்கு புரிந்து கொள்ள, ரஷ்யாவில் அதன் பரவலைக் கண்காணிப்பது, மண் மற்றும் விதை நோய்த்தொற்றுகளின் பங்கு மற்றும் சேமிப்பகத்தின் போது ஏற்படும் இழப்புகளில் கறுப்புப் புள்ளியின் பங்கு ஆகியவற்றைப் படிப்பது அவசியம். பி.சி.ஆர் கண்டறிதலின் பயன்பாடு இந்த வேலையை கணிசமாக எளிதாக்கும், மேலும் இரண்டு சோதனை முறைகளையும் ஒரே நேரத்தில் பயன்படுத்துவது பகுப்பாய்வின் துல்லியத்தை கணிசமாக அதிகரிக்கும்.
இந்த வேலைக்கு ரஷ்ய அறிவியல் அறக்கட்டளை எண் 18-76-00009 வழங்கிய மானியம் ஆதரிக்கப்பட்டது.
கட்டுரை "மைக்காலஜி அண்ட் பைட்டோபா ಥ ாலஜி" (தொகுதி 54, எண் 1, 2020) இதழில் வெளியிடப்பட்டது.